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產(chǎn)品說明：

     伊文斯藍(Evans Blue)又稱偶氮藍。伊文斯藍與臺盼藍都是細胞活性染料，常用于檢測細胞膜的 完整性和細胞是否存活。活細胞因有外排功能而無法被伊文斯藍染成藍色，而死細胞會被染成淡藍 色。因此可以通過此方法在顯微鏡下區(qū)分死細胞與活細胞，但無法區(qū)分死亡與壞死。

操作說明：（僅供參考）

(一)血腦屏障通透性

1、取處理后的實驗動物(以小鼠為例)，靜脈注射 Evans Blue Stain (0.5%)，小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍色。0.5～1h 后處死小鼠，取目的腦組織。 

2、腦組織置于 1.5ml 離心管中，加入 1ml PBS， 迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿, 離心。 

3、取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育。該步驟亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室溫孵育 24h。 

4、離心 15min。

5、取上述溶液，用分光光度計測 620 nm 處吸光值(OD 值)。同時測定已知不同梯度的標準依文思藍的 OD 值，繪制標準曲線。根據(jù)標準曲線計算出待測樣品的伊文斯蘭含量。

(二)活細胞染色 

1、取 100μl 重懸細胞到常規(guī)離心管內(nèi)，入 100μl Evans Blue Stain 輕輕混勻染色(染色時間可適當延長，但不宜超過10min)。

2、吸取少量經(jīng)過染色后的細胞，用血細胞計數(shù)板計數(shù)。通常如果要比較精確地進行定量，每個細胞樣品至少數(shù) 500 個細胞，數(shù)出藍色細胞和細胞總數(shù)。細胞存活率計算公式如下：細胞存活率＝(細胞總數(shù)－藍色細胞數(shù))/細胞總數(shù)×100%

注意事項： 

1、Evans Blue Stain 對人體有輕微毒性，請小心防護。 

2、細胞染色時，注意凋亡小體偶爾也有拒染現(xiàn)象。 

3、血腦屏障通透性實驗中，Evans Blue Stain 注射量應(yīng)根據(jù)不同動物以及動物的重量調(diào)整。 

4、最好采用低溫冷凍離心機進行離心。 

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。