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BN20133-50μl
50μl
¥340.00
產品描述
保存條件:4 °C 避光保存
本品用 DMSO 溶解,因 DMSO 的熔點是 18.5℃,使用前請放置到室溫充分溶解。
一、膠染法(用法同 EB)(推薦方法,見圖 1)
1、制膠時加入 SUPER Green I 核酸染料。冷卻膠至 50℃左右,每 100ml 膠中加入 3~5μl SUPER Green I 核酸染料。
2、按照常規方法進行電泳即可。
注:此方法染色可以準確確定核酸片段分子量,染料用量相對較少。1ml 染料大約可以做 300 塊 100ml 的膠。
二、點染法 (見圖 3)
1、該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和 PAGE 凝膠電泳。
2、工作液的配制:用電泳緩沖液將 10000×的 SUPER Green I 稀釋 100 倍,即為 SUPER Green I 工作液。SUPER Green I 工作液可以置 2~8℃保存一個月以上。
3、制膠:按常規方法制膠,不含任何染料。
4、樣品染色:向分析樣品中加入 SUPER Green I 工作液和載樣緩沖液,室溫放置 10 分 鐘,使 SUPER Green I 與樣品中 DNA 充分結合。SUPER Green I 工作液加入量為總上 樣量的 1/5~ 1/10。
5、DNA Marker 染色:將 5μl DNA Marker、5μl DNA Marker 稀釋液和 1μl SUPER Green I 工作液混勻,室溫放置 5 分鐘,使 SUPER Green I 與 DNA 充分結合。
6、上樣、電泳:按常規操作。 注:用點染法染色時,靈敏度最高,染料用量最少。但大片段稍有滯后現象,如果需要更準 確確定分子量(與 Marker 對比),建議使用膠染法。
三、泡染法
1、按照常規方法進行電泳。
2、用 pH 7.0~8.5 的緩沖液(如:TAE,TBE 或 TE),按照 10000﹕1 的比例稀釋 SUPER Green I 濃縮液,混勻,制成染色溶液。
3、將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中,放入凝膠,用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫 振蕩染色 10~30 分鐘,染色時間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿 上染色,將配好的稀釋溶液輕輕地倒在膠板上,讓稀釋液均勻地覆蓋整個膠板,并染色 30 分鐘。玻璃平皿必須預先經過硅烷化溶液處理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
注:用泡染法染色時,可以精確確定核酸片段分子量。但染料用量是三種方法中最多的。
四、點染+膠染法(見圖 2)
此法結合方法 1 和方法 2,靈敏度最高,對于低濃度樣本比 EB 檢測更靈敏。幾種染色方法特點比較
SUPER Green I 使用注意事項
1、在 SUPER Green I 點染法中,電泳時間不要超過 2 小時,否則 SUPER Green I 會從 DNA 上分離出來,會產生彌散狀條帶。
2、用點染方法染色時,條帶稍有滯后現象,如果需要確定片段精確分子量(與 Marker 對比), 建議使用膠染法(方法 1)。
3、在常規用酒精沉淀核酸的過程中,SUPER Green I 可以全部從雙鏈核酸上去掉。
4、如果想對用 SUPER Green I 染過的膠進行 Southern blots,建議在預雜化和雜化溶液 中加入 0.1%~0.3% 的 SDS。
5、在紫外照射透視下,與雙鏈 DNA 接合的 SUPER Green I 呈現綠色熒光。如果膠中含 有單鏈 DNA 則顏色為橘黃而不是綠色。
6、SUPER Green I 對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等 使用過程中用聚丙烯類容器。