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產品內容：

儲存條件 -20℃ 避光保存，有效期見外包裝。 

光譜特性 NucGreen: Ex/Em: 503/530 nm (with DNA) EthD-III: Ex/Em: 530/620 nm (with DNA)

產品介紹 

Live & DeadTM Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Bacteria Cells 包含兩種熒光染料，NucGreen 是綠色核酸染料，可染色活細菌和死細菌；EthD-III 是紅色核酸染料，僅染色細胞膜受損的死細菌。將 NucGreen 和 EthD-III 適當混用，具有完整細胞膜的細菌呈現綠色，而具有受損細胞膜的細菌在不同通道下可分別呈現綠色和紅色。 

細菌活力的常見標準是在合適的營養培養基中繁殖的能力，稱為生長測定。本試劑盒通常與在液體或固體培養基中的生長測定結果有著很好的一致性。然而，在某些條件下，膜損傷的細菌可能會在營養培養基中恢復并繁殖，而這種細菌在本測定中會被認定死菌。相反，一些具有完整膜的細菌可能無法在營養培養基中繁殖，但在本測定中會被認認定活菌。因此，若本試劑盒檢測結果和細菌生長測定之間有較大的差異，應考慮上述可能。

實驗方法 

以下實驗方案以 Escherichia coli 為例： 

1. 在合適的液體培養基中培養細菌至對數生長晚期。 

2. 向 EP 管中加入 1 mL 的菌液，5,000 ×g 離心 15 min。 

3. 去除上清液，加入 1 mL 的 0.85% NaCl 溶液重懸細菌。 

4. 5,000 ×g 離心 15 min，去除上清，加入 1 mL 的 0.85% NaCl 溶液重懸細菌。重復一次。 

5. 將菌懸液密度調整到 108 個細菌/ mL（OD670≈0.03）。 

6. 配制染色工作液：取 1 μL 的 NucGreen 和 2 μL 的 EthD-III，充分混勻后，加入 8 μL 的 0.85% NaCl 溶液。 

7. 取 1 mL 菌懸液，加 10 μL 的染色工作液。充分混合，室溫避光孵育 15 min。 

8. 染色結束后，取 10 μL 菌懸液滴加在帶有 18 mm 方形蓋玻片的載玻片上，盡快拍照，避免干片。 

9. 熒光顯微鏡成像。綠色熒光可使用 FITC 適用濾光片觀 察，紅色熒光可使用 PI 適用濾光片觀察。