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保存條件 

      常溫（10~25℃）保存 12 個(gè)月，其中 Proteinase K 保存條件 -20℃。 

產(chǎn)品簡介 

      本試劑盒可從≤25 mg 新鮮或冷凍的動(dòng)物組織（比如鼠尾、鼠趾、肝臟等）、血液、細(xì)胞中快速提取基 因組 DNA。 試劑盒采用優(yōu)化的緩沖體系，使裂解液中的DNA高效特異地結(jié)合到硅基質(zhì)吸附柱上。提 取過程無需使用苯酚或氯仿等有毒溶劑，得到的 DNA 濃度和純度高，可直接用于酶切、PCR、文庫構(gòu)建、 Southern Blot、分子標(biāo)記等下游實(shí)驗(yàn)。 

產(chǎn)品特點(diǎn) 

   ? DNA質(zhì)量高：提取的DNA濃度和純度較高，適用于對(duì)濃度、純度和完整性要求較高的下游實(shí)驗(yàn)；

   ? 安全低毒：無需酚、氯仿等有毒試劑。

適用范圍 

       本品適用于冷凍或新鮮動(dòng)物組織樣本、新鮮血液、細(xì)胞樣本的基因組DNA提取。

注意事項(xiàng) 

   1. 第一次使用前，按瓶上標(biāo)簽要求在 Buffer GW1 和 Buffer GW2 中加入相應(yīng)體積的無水乙醇；

   2. 使用前請(qǐng)檢查 Buffer GA1 和 Buffer GA2 是否出現(xiàn)沉淀，如有請(qǐng)于 37?C 水浴溶解后使用； 

   3. 若下游實(shí)驗(yàn)受 RNA 影響較大，可在步驟 2 結(jié)束后按照要求加入 RNase A（目錄號(hào)： BN20386）；

   4. 為保證基因組 DNA 得率及完整性，樣品請(qǐng)勿反復(fù)凍融； 5. 所有離心操作均在室溫下進(jìn)行。

使用方法 

   1) 血液及細(xì)胞樣本： 

   1. 樣本處理

   a. 哺乳動(dòng)物抗凝血液（無核紅細(xì)胞）：直接向 50~200 μL 新鮮或冷凍的抗凝血液樣品中加入 Buffer GA1 補(bǔ)足至 200 μL； 

   b. 禽類，鳥類，兩棲類或更低級(jí)生物的抗凝血液：其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，取 5~20 μL 新鮮或冷凍的 抗凝血液樣品，加入 Buffer GA1 補(bǔ)足至 200 μL； 

   c. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞：應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液（最大提取量為 5×106個(gè)細(xì)胞），10,000 rpm（~11,200× g）離心 1 min，棄盡上清，加 200 μL Buffer GA1，振蕩至樣品徹底懸浮； 

注意：如需去除 RNA，可在上述步驟完成后，加入 4 μL 濃度為 100 mg/mL 的 RNase A 溶液（目錄號(hào)： BN20386），渦旋 15 s，室溫放置 5 min。 

   2. 加入 20 μL Proteinase K 溶液，混勻后加入 200 μL Buffer GA2，渦旋振蕩充分混勻，70?C 水浴 10 min； 

   3. 短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。加入 200 μL 無水乙醇，渦旋振蕩充分混勻，短暫離心，進(jìn)入步驟 4 過柱純化；

   2）動(dòng)物組織樣本： 

   1. 樣本處理：正確的組織取樣量是獲得理想產(chǎn)量和純度的關(guān)鍵。初次使用時(shí)，推薦動(dòng)物組織量為 10~15 mg， 根據(jù)實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果再調(diào)整用量。樣品可用液氮研磨，或機(jī)械/玻璃勻漿器等工具 進(jìn)行勻漿。

   a. 針對(duì)普通動(dòng)物組織、內(nèi)臟組織等易于研磨的樣本： 

   液氮研磨：將研磨后的樣品置于 1.5 mL 離心管中，加入 200 μL Buffer GA1； 

   勻漿器勻漿：勻漿前向樣本中加入≤80 μL Buffer GA1 進(jìn)行勻漿，勻漿后再加入120 μL Buffer GA1； 

   b. 針對(duì)鼠尾等含較硬組織的樣本（過夜消化 6~8 h）：將組織樣品直接置于 1.5 mL 離心管中，加入 200 μL Buffer GA1； 

注意：確保各組織的量不超出推薦范圍。樣品量過多可能導(dǎo)致裂解不充分，導(dǎo)致裂解液粘稠堵塞吸附柱， 可能造成提取失敗或得率低。 

   2. 加入 20 μL Proteinase K (20 mg/mL)，渦旋振蕩徹底混勻。普通動(dòng)物組織 56?C 水浴充分裂解 1~3 h（鼠尾等較硬樣本需過夜消化 6~8 h），期間可數(shù)次顛倒或振蕩使樣品分散。如需去除 RNA， 可在此步驟完成后，加 入 4 μL 濃度為 100 mg/mL 的 RNase A 溶液（目錄號(hào)：BN20386），渦 旋振蕩 15 s，室溫放置 5~10 min； 

注意：若渦旋振蕩或孵育后仍有膠狀物，可再次加入 20 μL Proteinase K 后孵育或延長孵育時(shí)間。

   3. 加入 200 μL Buffer GA2，渦旋振蕩充分混勻，70?C 水浴 10 min。短暫離心后加入 200 μL 無水乙 醇， 立即渦旋振蕩充分混勻（此步驟可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)，某些組織如脾、肺，可 能形成溶膠狀產(chǎn)物，此時(shí)推薦進(jìn)行劇烈振蕩或渦旋處理），進(jìn)入步驟 4 過柱純化； 

過柱純化： 

   4. 短暫離心，將步驟 3 所得溶液和絮狀沉淀全部加入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm（~13,400 ×g）離心 30 s，倒掉收集管中廢液，將吸附柱重新放回收集管中，若一次不能加 完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入； 

   5. 向吸附柱中加入500 μL Buffer GW1（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm（~13,400 ×g）離心 30 s，倒掉收集管中廢液，將吸附柱重新放回收集管中； 

   6. 向吸附柱中加入600 μL Buffer GW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm（~13,400 ×g）離心 30 s，倒掉收集管中廢液，將吸附柱重新放回收集管中； 

   7. 重復(fù)步驟 6 ； 

   8. 12,000 rpm（~13,400×g）離心 2 min，開蓋室溫晾干數(shù)分鐘；

注意：此步為去除殘余漂洗液，不可省略。 

   9. 將吸附柱置于新的離心管（自備）中， 向吸附膜中間部位懸空滴加 50~200 μL Buffer TE 或 ddH2O，室溫放置 2~5 min，12,000 rpm（~13,400 ×g）離心 2 min，收集 DNA 溶液，-20℃ 保存 DNA。

注意：

   1) 若需增加產(chǎn)量，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置 2~5 min，12,000 rpm（~13,400×g） 離心 2 min； 

   2) 如果下游實(shí)驗(yàn)對(duì) pH 值或 EDTA 敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的 pH 值對(duì)洗脫效率有較大影響， 若用水作洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 7.0~8.5（可以用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)到此范圍），如需長 期保存，推薦用 Buffer TE 洗脫并于 -20°C 保存。 

常見問題與解決辦法 

   Q1：柱子堵塞？ 

   A1： 

   1) 樣品用量過多。建議按照說明書推薦量進(jìn)行提取，尤其是富含 DNA 的組織需注意減少用量； 

   2) 樣品未充分裂解或研磨。充分裂解或研磨樣品，鼠尾組織建議過夜消化；

   3) 離心溫度過低。本產(chǎn)品使用操作均在室溫下進(jìn)行。 

   Q2：DNA 得率低？ 

   A2： 

   1) 樣品裂解不充分。若樣品過量則適當(dāng)減少樣品量，延長56?C孵育時(shí)間，或在步驟 2 中再加入 20 μL Proteinase K（20 mg/mL）消化；

   2) 樣品用量過少。建議按照說明書推薦量進(jìn)行提取；

   3) 樣品材料質(zhì)量不好。盡量選用新鮮組織樣品，樣品采集后應(yīng)液氮速凍，然后置于-80℃保存，建議盡快提取，避免反復(fù)凍融。 

   Q3：后期實(shí)驗(yàn)受 RNA 影響？ 

   A3： 

   1) 未加入 RNase A 消化。若后續(xù)實(shí)驗(yàn)需要去除 RNA 影響， 可按照說明書步驟加入 RNase A 消化； 

   2) 樣品中RNA含量過多。可適當(dāng)增加 RNase A 用量或延長消化時(shí)間。