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FUJIFILM Wako和光純藥質譜級賴氨酰肽鏈內切酶

質譜級賴氨酰肽鏈內切酶

Lysyl Endopeptidase

本產品是質譜分析前處理時最常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內切酶，該酶可以特異性切除賴氨酸基團C末端的多肽，可用于蛋白測序分析和Lys-X化合物的酶合成。若同時使用賴氨酰肽鏈內切酶和胰酶，可更好地切斷賴氨酸 基團的多肽，增加多肽的數(shù)量。產品已按照使用習慣做成小包裝，是方便使用的冷凍干燥品。

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來源：細菌

外觀：凍干粉（包含2 mmol/L Tris-HCl緩沖液，pH 8）
活性：0.03～0.07 AU/vial
分子量：27,000(瓊脂糖過濾)，30,000（SDS-PAGE）
溶解性：溶于水或緩沖液
穩(wěn)定性：溶解于pH值5.0-12.0的Tris緩沖液中，可在4℃穩(wěn)定保存2年；在pH值6.0-11.0 30℃時能穩(wěn)定保存，但溫度超過50℃時不穩(wěn)定。
最適pH值：9.0~9.5
等電點：6.9~7.0 
底物特異性：
可水解底物——Tos-Lys-OMe,Bz-Lys-NH2,Bz-Lys-pNA,Lys-pNA
不可水解底物——Bz-Arg-NH2,Bz-Arg-pNA,Arg-pNA
抑制劑：DFP，PMSF，TLCK

◆特點

●  高特異性、高蛋白質消化率、適用于蛋白質譜分析

●  提高裂解效率、增加肽段數(shù)量
●  根據(jù)使用量特意制備小包裝，方便使用

◆應用
分別采用胰蛋白酶(Tp)、賴氨酰肽鏈內切酶 (Lys-C) 和Tp與Lys-C聯(lián)用進行膠內酶切的效果比較。
牛血清蛋白BSA 的條帶(100 ng) 通過SDS-PAGE 獲得，然后分別用Tp、Lys-C和Lys-C+Tp進行酶切，再用MALDI-TOFMS法進行分析。
這些蛋白酶的實驗效果見下表。

表 1：Tp、Lys-C和Lys-C+Tp的結果對照
這些結果表明Lys-C酶解的錯誤裂解率最低。Tp酶解時加入Lys-C后，錯誤裂解率有所降低，同時，可以鑒定出更多的多肽。

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胰蛋白酶 (Tp)( 圖 a) 和賴氨酰肽鏈內切酶 (Lys-C)+Tp ( 圖 b) 酶切后的質譜結果對照圖。

Lys-C+Tp酶切后，可以在m/z=2000時得到吸收峰，而單獨的Tp酶切在m/z=2000時沒有吸收峰。該結果表明Lys-C可以提高測序覆蓋度。
( 數(shù)據(jù)由大阪醫(yī)療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada博士提供 )


◆賴氨酰肽鏈內切酶

賴氨酰肽鏈內切酶，最初由Masaki 等人從土壤細菌中分離得到。該酶可以特異性剪切賴氨酸殘基C 末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵，用于蛋白測序和Lys-X化合物的酶催化合成。該酶穩(wěn)定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小時之后，仍然擁有完整的生物活性。

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◆產品列表

品牌編號產品名稱規(guī)格產品等級
FUJIFILM Wako125-05061賴氨酰肽鏈內切酶，MS級20 μg×5質譜級